NUÔI CẤY TÚI PHẤNI. CHUẨN BỊ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY

2. Quy trình pha chếMuốn pha 1 lít môi trường nuôi cấy cần thực hiện các bước sau:ě Đong 100ml khoáng đa lượng + 10ml khoáng vi lượng + 10ml Fe-EDTA. ě Vitamin gồm: Nicotinic acid, Pyridoxin, Thiamin (mỗi loại lấy 1000µl bằng micropipet).ě Nước dừa : 100mlě Đường sucrose: 30gKhuấy đều hỗn hợp trên, sau đó đổ vào ống đong 1000ml, lên thể tích.Chia thành 2 phần đều nhau. Sau đó cho vào mỗi phần 3.5g agar và chất điều hòa sinh trưởng:• Phần I: 2000µl NAA nồng độ 50mg/100ml• Phần II: 1000µl BA nồng độ 100mg/100mlChuẩn độ pH lên 5.8. Sau đó đun sôi môi trường ở nhiệt độ 240

⁰

C. Cho vào từng nghiệm thức.II. Chuẩn bị mẫu cấy Khử trùng bông lúa và bắpě Lấy bông lúa và bắp được tiền xử lý lạnh trước đó cho vào tủ cấy.ě Lột bỏ lớp lá ngoài của bông lúa.ě Dùng bông gòn tẩm cồn 70

⁰

lau qua lớp lá bao gié lúa và cho vào keo sạch đã khử trùng..ě Ngâm trong dung dich HgCl

2

0,1% trong 15 phút.ě Rửa 3 lần với nước cất khử trùng. Khử trùng bông đậu rồngě Lấy bông đậu được tiền xử lý lạnh trước đó cho vào tủ cấy.ě Dùng bông gòn tẩm cồn 70

⁰

lau qua lá đài bao bông đậu và cho vào keo sạch đã khử trùng.ě Ngâm trong dung dich HgCl

2

0,1% trong 10 phút.